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聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳的几个不连续性?

日期:2018-01-11 10:57:13 标签: 人气:

       丙稀酰胺、甲叉双丙稀酰胺、缓冲液和催化剂等溶液按一定比例加到用琼脂封了底的玻璃管中,聚合后得到圆柱胶。柱胶胶面之上加上待分离的样品,接入直流电源电路中,经过一定时间的电泳,样品中各组分在柱胶中得到分离,分布在不同层次上。电泳结束后将胶条剥出,经染色、脱色处理,从胶条侧面可见到一个一个的组分条带,与多个圆盘迭加在一起相似,故将在柱胶中进行的电泳分离技术称为聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。

       在浓缩胶中,除了有电荷效应和分子筛效应外,还存在一种特殊的浓缩效应。该效应是以上多种不连续效应综合作用的结果。这种不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳由于兼有电荷效应、浓缩效应和分子筛效应,因此具有很高的分辨率。其分子筛效应主要由凝胶孔径大小决定,而决定凝胶孔径的大小主要是凝胶的浓度。但交联剂对电泳泳动率亦有影响,交联剂重量对总单位重量的百分比越大,则电泳泳动率越小。不管交联剂是以何种方式影响电泳时的泳动率,总之它是影响凝胶孔径的一个重要参数。为了使实验的重复性较高,在制备凝胶时对交联剂的浓度、交联剂与丙稀酰胺的比例、催化剂的浓度、聚胶所需时间等影响泳动率的因子都应尽可能保持恒定。

        实际操作时,在玻璃管中分两次灌胶。先灌下层的分离胶,待其聚合后再灌上层的浓缩胶。这样制得的凝胶柱实际上是个不连续体系。利用该体系中凝胶孔径的不连续性、缓冲液离子成分的不连续性、pH的不连续性及电位梯度的不连续性,先使进入柱胶的样品在浓缩胶中逐渐浓缩、在上下胶层界面上最终被压缩成很薄的样品区带,进入分离胶后再进行组分的分离,形成最终的分离区带。根据分离胶缓冲液pH值高低,有3种操作系统,分别为碱性系统、酸性系统和中性系统,其中以碱性系统最为常用。


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